Plasmide CRISPR d'Activation (h) ENX-2: sc-403611-ACT

EZH1 humain code la protéine du groupe Polycomb ENX-2, une sous-unité catalytique de PRC2 qui dépose la marque histonique répressive H3K27me3 afin de réguler la compaction de la chromatine et le silençage génique à long terme. ENX-2 contribue au contrôle de programmes transcriptionnels spécifiques de lignage au cours du développement et de la différenciation, reliant la régulation épigénétique au contrôle du cycle cellulaire et au maintien de l’identité cellulaire. Au sein de PRC2, EZH1 agit aux côtés de partenaires centraux tels que EED et SUZ12 pour coordonner la répression transcriptionnelle sur les loci cibles de Polycomb. Une activité PRC2 dérégulée et des paysages de méthylation de H3K27 altérés sont fréquemment étudiés en biologie du cancer, lors des transitions d’état des cellules souches et dans la régulation génique du neurodéveloppement, ce qui fait d’EZH1 un nœud pertinent pour l’étude des mécanismes épigénétiques.

ENX-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EZH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ENX-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EZH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EZH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ENX-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EZH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ENX-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ENX-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de EZH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.