Plasmide Double Nickase (m) ENX-1: sc-420259-NIC

Ezh2 chez la souris code la méthyltransférase d’histones ENX-1, cœur catalytique du complexe répressif Polycomb 2 (PRC2), qui dépose la marque H3K27me3 afin d’imposer un silençage transcriptionnel stable au cours du développement et de la spécification du destin cellulaire. Par la compaction de la chromatine médiée par PRC2, ENX-1 influence les programmes d’engagement de lignée, le contrôle du cycle cellulaire et les réseaux de gènes associés à la différenciation, en s’intégrant à des régulateurs épigénétiques et à des facteurs de transcription pour maintenir des états de chromatine répressifs. Une activité d’EZH2/ENX-1 dérégulée est associée à des paysages de chromatine altérés et à des programmes d’expression génique aberrants observés dans divers modèles de cancer et de biologie du développement, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude du contrôle épigénétique de la prolifération et de l’identité cellulaire. Dans les systèmes murins, la perturbation d’Ezh2 est largement utilisée pour explorer les voies dépendantes de Polycomb, notamment le maintien des cellules souches, la différenciation des cellules immunitaires et la régulation génique au cours du neurodéveloppement.

ENX-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ezh2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ezh2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ezh2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ezh2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.