Plasmide Double Nickase (h) ENX-1: sc-417028-NIC

EZH2 code pour la méthyltransférase d’histones ENX-1, sous-unité catalytique du complexe répressif Polycomb 2 (PRC2), qui dépose la marque H3K27me3 afin d’imposer le silençage transcriptionnel et la mémoire épigénétique. Par la compaction de la chromatine médiée par PRC2, ENX-1 régule la spécification des lignages, les programmes du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et le maintien d’états de type souche, en contrôlant l’accessibilité au niveau de loci de gènes du développement et de la signalisation. Une activité d’EZH2 dérégulée est associée à des états de chromatine altérés qui soutiennent des programmes transcriptionnels oncogéniques et une différenciation aberrante dans de multiples contextes tumoraux. En tant que régulateur épigénétique central, EZH2 est fréquemment étudié dans des voies gouvernant la prolifération, la plasticité épithélio-mésenchymateuse et l’expression de gènes liés à l’immunité.

ENX-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EZH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EZH2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EZH2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EZH2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.