eNOS Plasmide Double Nickase (h): sc-400127-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eNOS Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eNOS Double Nickase Plasmid (h) e il eNOS Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NOS3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eNOS Antibody (A-9): sc-376751
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eNOS Plasmide Double Nickase (h) | sc-400127-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eNOS Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400127-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NOS3 codifica la sintasi dell’ossido nitrico endoteliale (eNOS), un enzima regolato da calcio/calmodulina che genera ossido nitrico a partire dalla L-arginina per controllare il tono vascolare, la reattività piastrinica e le interazioni leucocita–endotelio. L’attività di eNOS è integrata con la segnalazione PI3K–AKT, la meccanotrasduzione indotta dallo shear stress e la regolazione post-traduzionale, inclusa la fosforilazione e l’accoppiamento al bilanciamento redox dipendente dalla tetraidrobiopterina. Una segnalazione NOS3/eNOS disfunzionale è associata a disfunzione endoteliale, angiogenesi alterata e vie di stress ossidativo implicate nella biologia delle malattie cardiovascolari e metaboliche. In quanto determinante centrale della biodisponibilità di ossido nitrico, eNOS è ampiamente studiata in modelli di infiammazione, risposte all’ipossia e rimodellamento vascolare.
eNOS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NOS3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NOS3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NOS3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NOS3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.