Plasmide Double Nickase (h) eNOS: sc-400127-NIC

NOS3 code la nitric oxide synthase endothéliale (eNOS), une enzyme régulée par le calcium/la calmoduline qui produit du monoxyde d'azote à partir de la L-arginine afin de contrôler le tonus vasculaire, la réactivité plaquettaire et les interactions leucocytes–endothélium. L'activité d'eNOS s'intègre aux voies de signalisation PI3K–AKT, à la mécanotransduction induite par les forces de cisaillement, ainsi qu'à une régulation post-traductionnelle incluant la phosphorylation et le couplage à l'équilibre rédox dépendant de la tétrahydrobioptérine. Une signalisation NOS3/eNOS dérégulée est associée à la dysfonction endothéliale, à une angiogenèse altérée et à des voies de stress oxydant impliquées dans la biologie des maladies cardiovasculaires et métaboliques. En tant que déterminant central de la biodisponibilité du monoxyde d'azote, eNOS est largement étudiée dans des modèles d'inflammation, de réponse à l'hypoxie et de remodelage vasculaire.

eNOS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NOS3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NOS3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NOS3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NOS3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.