Plásmido Doble Nickase (m) ENOPH1: sc-426793-NIC

Enoph1 codifica la enzima murina ENOPH1, una proteína metabólica implicada en procesos intracelulares de óxido‑reducción y dependientes de tioles, que vincula el estado energético celular con vías de desintoxicación y de adaptación al estrés. La actividad de ENOPH1 se aborda comúnmente en el contexto del metabolismo asociado al glutatión y de intermediarios relacionados, con efectos posteriores sobre el manejo del estrés oxidativo, la función mitocondrial y la homeostasis metabólica general. La alteración de estos procesos puede influir en programas de proliferación y supervivencia en tejidos con alta actividad metabólica y es relevante para la investigación sobre disfunción metabólica y fenotipos asociados al estrés. En consecuencia, Enoph1 es una diana útil para desentrañar cómo el amortiguamiento redox y el metabolismo de pequeñas moléculas moldean la fisiología celular en modelos murinos.

ENOPH1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Enoph1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Enoph1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Enoph1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Enoph1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.