Plasmide Double Nickase (h) ENL: sc-408751-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ENL correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ENL Double Nickase (h) et le plasmide ENL Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MLLT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ENL Antibody (D-6): sc-393196
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ENL | sc-408751-NIC | 20 µg | $410.00 |
MLLT1 code le coactivateur transcriptionnel ENL, une protéine à domaine YEATS qui se lie aux histones acétylées et contribue à coupler l’état de la chromatine à l’élongation transcriptionnelle dépendante de l’ARN polymérase II. ENL agit au sein d’assemblages apparentés au complexe de super‑élongation et coopère avec des régulateurs épigénétiques pour contrôler l’activité des enhancers et des promoteurs au cours des programmes géniques hématopoïétiques et du développement. Une transcription dépendante d’ENL dérégulée est impliquée dans des signatures d’expression génique oncogéniques, notamment dans des contextes où MLLT1 participe à des réarrangements chromosomiques et à un recrutement aberrant sur la chromatine. Ces propriétés font de MLLT1/ENL une cible utile pour disséquer les mécanismes des lecteurs de chromatine, la levée de la pause transcriptionnelle et les réseaux régulateurs spécifiques de lignée dans les cellules humaines.
ENL Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MLLT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MLLT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MLLT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MLLT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.