Plasmide CRISPR d'Activation (h) Enigma: sc-403254-ACT

Le gène humain **PDLIM7** code **Enigma**, une protéine adaptatrice à domaines **PDZ–LIM** qui se localise au cytosquelette d’actine et à des structures associées aux adhésions focales, reliant des complexes de signalisation au remodelage du cytosquelette. Enigma participe aux programmes de mécanotransduction et de motilité cellulaire en coordonnant des interactions protéine–protéine au sein des réseaux d’adhésion et de fibres de stress, influençant des voies qui régissent l’architecture cellulaire et la différenciation. Grâce à ses fonctions d’échafaudage, **PDLIM7** a été étudié dans des contextes liés à l’organisation du muscle cardiaque et du muscle squelettique, où l’intégrité du cytosquelette et la régulation transcriptionnelle sont étroitement couplées. Dans la littérature, une expression ou une localisation dérégulée de **PDLIM7** a été associée à des altérations de la migration cellulaire et à des phénotypes de remodelage tissulaire pertinents pour la biologie cardiovasculaire et oncogénique.

Enigma Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PDLIM7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Enigma Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PDLIM7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PDLIM7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Enigma. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PDLIM7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Enigma au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Enigma dans les cellules tumorales présentant une expression de PDLIM7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.