Plasmide CRISPR d'Activation (h) ENHO: sc-418381-ACT

ENHO code l’hormone peptidique adropine, un facteur sécrété impliqué dans l’homéostasie énergétique systémique et la régulation cardiométabolique. L’expression d’ENHO a été associée à la détection des nutriments et à l’adaptation métabolique, en influençant l’utilisation du glucose et des lipides ainsi que des programmes de signalisation qui coordonnent le métabolisme hépatique, la fonction vasculaire et la physiologie du muscle squelettique. Dans des modèles cellulaires, les effets associés à l’adropine recoupent des voies contrôlant la fonction mitochondriale, les réponses au stress oxydatif et la signalisation endothéliale, ce qui fait d’ENHO un nœud pertinent pour étudier la reprogrammation métabolique. Des taux d’ENHO/adropine modifiés ont été rapportés dans des contextes liés à l’obésité, à la résistance à l’insuline, à la stéatose hépatique et à la dysfonction cardiovasculaire, ce qui étaye sa pertinence pour la recherche mécanistique plutôt que pour une inférence clinique.

ENHO Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ENHO sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ENHO Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ENHO dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ENHO, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ENHO. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ENHO natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ENHO au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ENHO dans les cellules tumorales présentant une expression de ENHO silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.