Endothelin-2/EDN2/ET-2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403871-NIC

EDN2 codifica a endotelina-2 (ET-2), um peptídeo vasoativo secretado da família das endotelinas que sinaliza principalmente por meio dos receptores de endotelina ETA (EDNRA) e ETB (EDNRB), regulando a contração do músculo liso, o tônus vascular e a comunicação parácrina. A ET-2 ativa a sinalização acoplada à proteína G, modulando o fluxo de cálcio intracelular, cascatas de PKC/MAPK e programas transcricionais a jusante que afetam proliferação, migração e remodelamento da matriz extracelular. A expressão de EDN2 é rigidamente regulada em tecidos reprodutivos e durante hipóxia e inflamação, ligando-a a processos como a ruptura folicular associada à ovulação, respostas angiogênicas e recrutamento de células imunes. A sinalização desregulada por endotelina tem sido implicada no remodelamento cardiovascular, em fenótipos fibróticos e em alterações do microambiente associado a tumores, tornando o EDN2 um nó útil para estudos mecanísticos de vias acionadas por GPCR.

Endothelin-2/EDN2/ET-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EDN2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EDN2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EDN2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EDN2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.