Plásmido Doble Nickase (h) Endophilin II: sc-401620-NIC

SH3GL1 codifica la endofilina II, un adaptador que contiene un dominio SH3 y que conecta la detección de curvatura de la membrana con la endocitosis al interactuar con socios ricos en prolina y con módulos de unión a lípidos durante la formación de vesículas mediada por clatrina. La endofilina II participa en el reciclaje de vesículas sinápticas y en la internalización de receptores, vinculando el tráfico de membranas con la remodelación de actina y con salidas de señalización de receptores de factores de crecimiento e inmunitarios. Por su papel en la dinámica de las vías endocíticas y en las redes de interacción proteína–proteína, SH3GL1 se ha estudiado en contextos en los que el tráfico vesicular influye en la proliferación celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. La regulación alterada de SH3GL1 o eventos de fusión se han asociado con fenotipos de señalización y de tráfico relevantes para neoplasias hematológicas, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos en biología del cáncer y en la función de células inmunitarias.

Endophilin II El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SH3GL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SH3GL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SH3GL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SH3GL1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.