Plasmide Double Nickase (h) ENDOG: sc-403263-NIC

ENDOG code l’endonucléase G, une nucléase localisée dans la mitochondrie qui participe au métabolisme de l’ADN mitochondrial et peut contribuer à la fragmentation de l’ADN nucléaire en situation de stress cellulaire. Cette protéine a été associée à des processus liés à l’apoptose intrinsèque et à l’homéostasie mitochondriale, en interaction avec des voies impliquées dans la réponse au stress oxydant et le maintien de l’intégrité du génome. Une activité d’ENDOG altérée a été mise en relation avec des phénotypes impliquant une dysfonction mitochondriale et une sensibilité accrue aux dommages de l’ADN, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du stress métabolique et de la régulation de la mort cellulaire. En tant que nucléase conservée, ENDOG est également utilisé comme facteur modèle pour disséquer la signalisation mitochondrie–noyau lors de la dégradation de la chromatine induite par le stress.

ENDOG Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ENDOG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ENDOG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ENDOG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ENDOG.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.