Plásmido CRISPR de Activación (h) Endo180: sc-403483-ACT

MRC2 codifica Endo180 (uPARAP), un receptor endocítico transmembrana de la familia del receptor de manosa que se une a colágenos y a otros ligandos de la matriz extracelular y los internaliza para su degradación lisosomal. La actividad de Endo180 favorece el recambio de la matriz extracelular, la adhesión y la migración celular, y la remodelación del microambiente tumoral mediante vías de captación y tráfico de colágeno acopladas al procesamiento endosomal–lisosomal. Este receptor se estudia con frecuencia en fibroblastos, células de linaje macrófago y modelos de carcinoma invasivo, en los que la dinámica del colágeno determina la arquitectura tisular y la señalización. La expresión desregulada de MRC2/Endo180 se asocia con remodelación fibrótica y con la biología de la invasión tumoral, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos del comportamiento celular impulsado por la matriz.

Endo180 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MRC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Endo180 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MRC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MRC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Endo180. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MRC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Endo180 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Endo180 en células tumorales con expresión de MRC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.