Plasmide Double Nickase (h) EN1/Engrailed 1: sc-405900-NIC

EN1 (Engrailed 1) code un facteur de transcription à homéoboîte qui régule la mise en place des patrons embryonnaires et le développement neural en contrôlant des programmes d’expression génique impliqués dans la spécification du destin cellulaire, la différenciation et le guidage axonal. Dans les cellules humaines, EN1 contribue à des réseaux transcriptionnels qui s’entrecroisent avec des voies de signalisation du développement telles que Wnt/β-caténine et SHH, influençant l’identité régionale et la morphogenèse des tissus. Une expression d’EN1 dérégulée ou un contrôle épigénétique altéré ont été associés à des programmes de lignée modifiés et à des phénotypes liés aux tumeurs dans divers contextes, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la réactivation de programmes développementaux et les transitions d’état cellulaire. EN1 est donc fréquemment étudié dans des modèles de neurodéveloppement, de maintien neuronal et de remaniement transcriptionnel lié aux maladies.

EN1/Engrailed 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.