Plásmido Doble Nickase (h) Emx1: sc-402711-NIC

EMX1 codifica el factor de transcripción homeobox Emx1, una proteína de unión al ADN específica de secuencia que ayuda a regular el patrón del telencéfalo dorsal y la corticogénesis durante el neurodesarrollo humano. Emx1 regula programas de expresión génica vinculados a la especificación del destino neuronal, la proliferación de progenitores y la identidad regional, integrándose en redes transcripcionales más amplias que coordinan el desarrollo del prosencéfalo. La perturbación de los circuitos reguladores asociados a EMX1 es relevante para estudiar los mecanismos subyacentes a fenotipos del neurodesarrollo y a una organización cortical alterada, y EMX1 se utiliza con frecuencia como locus de referencia para evaluar el desempeño de la ingeniería del genoma en células humanas. Como factor de transcripción nuclear, Emx1 proporciona un modelo manejable para investigar cómo los programas transcripcionales del desarrollo moldean las transiciones de estado celular y las decisiones de linaje.

Emx1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EMX1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EMX1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EMX1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EMX1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.