Plasmide Double Nickase (h) EMSY: sc-405722-NIC

EMSY code une protéine nucléaire associée à la chromatine, impliquée dans la régulation de la réparation des cassures double brin de l’ADN via des interactions avec BRCA2 et la modulation de la recombinaison homologue. En influençant l’état de la chromatine et la réponse aux dommages de l’ADN, EMSY contribue à la stabilité du génome, à la signalisation du stress de réplication et au contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire. Des altérations de la dose d’EMSY ou une expression dérégulée ont été associées à un choix anormal des voies de réparation ainsi qu’à des programmes transcriptionnels impliqués dans la transformation oncogénique et la progression tumorale. Par conséquent, EMSY est fréquemment étudié dans le contexte des réseaux de réparation de l’ADN, du remodelage de la chromatine et des déterminants de la sensibilité au stress génotoxique dans les cellules humaines.

EMSY Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EMSY dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EMSY. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EMSY. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EMSY.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.