Particules Lentivirales d'Activation (h) EMR1: sc-400698-LAC

ADGRE1 code pour EMR1, un récepteur d’adhérence couplé aux protéines G de la famille EGF‑TM7, fortement associé à la biologie des cellules myéloïdes et à la détection du microenvironnement immunitaire. EMR1 participe aux interactions cellule‑cellule et cellule‑matrice via ses domaines extracellulaires de type EGF et peut influencer des processus tels que l’adhésion des leucocytes, l’infiltration tissulaire et la polarisation fonctionnelle des macrophages. Dans le cadre de programmes plus larges de signalisation liés aux RCPG et de l’immunité innée, EMR1 est couramment utilisé comme marqueur pour caractériser les états de la lignée myéloïde et le remodelage inflammatoire des tissus. Une activation myéloïde dysrégulée et des signatures associées à EMR1 altérées sont pertinentes pour l’étude de l’inflammation chronique, de la biologie des macrophages associés aux tumeurs, ainsi que des pathologies fibrosantes ou à médiation immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales EMR1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ADGRE1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EMR1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ADGRE1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EMR1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ADGRE1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.