EMP-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407036

Descripción general

EMP3 codifica la proteína de membrana epitelial 3 (EMP-3), una proteína de membrana tipo tetraspanina implicada en la regulación de la adhesión celular, la organización de la membrana y la transducción de señales en la superficie celular. En células humanas, EMP-3 se ha relacionado con la modulación de vías implicadas en la proliferación y las respuestas al estrés, incluidas la señalización asociada a receptores y componentes aguas abajo de las redes MAPK/PI3K, dependiendo del contexto celular. Se han descrito patrones alterados de expresión de EMP3 en múltiples tipos de tumores y en estudios relacionados con enfermedades neurológicas, lo que respalda su uso como variable molecular en modelos de señalización oncogénica, invasión y diferenciación. Como factor asociado a membrana, EMP-3 también es relevante para desentrañar cambios en las interacciones célula–célula y en las respuestas al microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EMP-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EMP3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EMP3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EMP3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EMP-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EMP3 para la investigación de la señalización de EMP-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EMP3 críticos para la función de EMP-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EMP3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EMP-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EMP-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EMP3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EMP-3 (h) y el plásmido HDR EMP-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EMP3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EMP3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.