Plasmide CRISPR d'Activation (h) emerin: sc-401048-ACT

Le gène humain **EMD** code l’émerine, une protéine de la membrane nucléaire interne contenant un domaine LEM, qui ancre la lamina nucléaire et couple le noyau aux forces du cytosquelette via des interactions avec les lamines, BAF et des composants associés au complexe LINC. L’émerine contribue à l’organisation de l’enveloppe nucléaire, à la mécanotransduction et à l’ancrage de la chromatine, influençant la régulation transcriptionnelle, les réponses aux dommages de l’ADN et la progression du cycle cellulaire. La perturbation de l’architecture nucléaire dépendante de l’émerine est associée à une pathologie spécifique de certains tissus, notamment le muscle strié et les systèmes de conduction cardiaque, faisant d’**EMD** un modèle largement utilisé pour l’étude de la biologie des maladies liées à l’enveloppe nucléaire. En tant qu’échafaudage à la périphérie nucléaire, l’émerine est fréquemment étudiée dans les voies qui régissent la rigidité nucléaire, la stabilité du génome et les programmes d’expression génique dépendants de la différenciation.

emerin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EMD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

emerin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EMD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EMD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de emerin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EMD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de emerin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie emerin dans les cellules tumorales présentant une expression de EMD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.