Plasmide CRISPR d'Activation (h) Embigin: sc-408321-ACT

Le gène humain **EMB** code l’embigine, une glycoprotéine transmembranaire de type I appartenant à la superfamille des immunoglobulines, qui agit comme sous-unité accessoire des transporteurs de monocarboxylates et module les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. En soutenant les flux de lactate et de pyruvate à travers les complexes MCT, l’embigine contribue à l’homéostasie métabolique, à la régulation du pH et à l’adaptation au microenvironnement dans les tissus en prolifération. La biologie liée à **EMB** recoupe des voies impliquées dans l’adhérence, la migration et l’utilisation des nutriments, des processus fréquemment reprogrammés lors de l’oncogenèse et des états inflammatoires. Une expression dérégulée de l’embigine a été rapportée dans plusieurs contextes associés à des maladies, ce qui en fait un point d’entrée pertinent pour des études mécanistiques du remodelage métabolique et de l’invasivité cellulaire.

Embigin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EMB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Embigin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EMB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EMB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Embigin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EMB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Embigin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Embigin dans les cellules tumorales présentant une expression de EMB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.