Plasmide CRISPR d'Activation (h) ELOVL6: sc-413125-ACT

ELOVL6 (elongase d’acides gras à très longue chaîne 6) est une élongase microsomale des acides gras qui catalyse, dans le réticulum endoplasmique, l’allongement d’acides gras saturés et mono-insaturés en C12–C16 vers des espèces à chaîne plus longue, telles que le stéarate (C18:0). En modulant le pool cellulaire d’acyl-CoA à longue chaîne, ELOVL6 influence la lipogenèse de novo, la composition lipidique des membranes, ainsi que la biosynthèse en aval des glycérolipides et des sphingolipides. L’activité d’ELOVL6 s’inscrit à l’interface de réseaux de signalisation métabolique, notamment des programmes transcriptionnels pilotés par SREBP1 et des réponses au stress médiées par les lipides, qui modulent la sensibilité à l’insuline et l’inflammation. Des altérations de l’expression d’ELOVL6 ont été associées à une dérégulation de l’homéostasie lipidique observée dans des phénotypes de maladies métaboliques, notamment la stéatose hépatique, la résistance à l’insuline liée à l’obésité et des états de risque cardiométabolique.

ELOVL6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ELOVL6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ELOVL6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ELOVL6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ELOVL6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ELOVL6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ELOVL6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ELOVL6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ELOVL6 dans les cellules tumorales présentant une expression de ELOVL6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.