Plasmide CRISPR/Cas9 KO ELOVL3 (h): sc-407282

Présentation

ELOVL3 (protéine 3 d’élongation des acides gras à très longue chaîne) est une élongase localisée dans le réticulum endoplasmique qui catalyse l’allongement d’acyl-CoA d’acides gras saturés et mono-insaturés afin de produire des acides gras à très longue chaîne utilisés dans la biosynthèse des lipides complexes. Par son rôle dans l’élongation des acides gras, ELOVL3 contribue à l’homéostasie lipidique, à la composition des membranes et à la formation de réserves et de pools de signalisation dérivés des lipides, qui influencent le métabolisme cellulaire. L’activité d’ELOVL3 est associée à des programmes du métabolisme lipidique dans des tissus à fort renouvellement lipidique, et la dérégulation des voies d’élongation est fréquemment étudiée dans le contexte d’un déséquilibre métabolique et d’un stress cellulaire lié aux lipides. Une composition modifiée en acides gras à très longue chaîne peut affecter la fonction des organites et la signalisation inflammatoire, faisant d’ELOVL3 un nœud pertinent pour des études mécanistiques des phénotypes associés au métabolisme lipidique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ELOVL3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ELOVL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ELOVL3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ELOVL3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ELOVL3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ELOVL3 pour l'étude de la signalisation de ELOVL3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ELOVL3 essentiels à la fonction de ELOVL3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ELOVL3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ELOVL3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ELOVL3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ELOVL3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ELOVL3 plasmide HDR (h) et le ELOVL3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ELOVL3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ELOVL3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.