ELOVL2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404998-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ELOVL2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ELOVL2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ELOVL2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ELOVL2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ELOVL2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404998-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ELOVL2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404998-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELOVL2 (Elongation von sehr langkettigen Fettsäuren, Protein 2) ist eine im endoplasmatischen Retikulum lokalisierte Fettsäure-Elongase, die geschwindigkeitsbestimmende Elongationsschritte katalysiert und dabei langkettige mehrfach ungesättigte Fettsäuren (PUFAs) erzeugt, einschließlich Vorstufen für die DHA-Biosynthese. Durch die Prägung der Zusammensetzung von Membranphospholipiden und lipidabgeleiteten Signalmediatoren beeinflusst ELOVL2 zelluläre Prozesse wie Membranfluidität, Reaktionen auf oxidativen Stress und die metabolische Homöostase. Veränderte ELOVL2-Aktivität und -Regulation wurden mit altersassoziierten Veränderungen des Lipidstoffwechsels und des epigenetischen Zustands in Verbindung gebracht und in Kontexten wie der Retina-Biologie, Neurobiologie und Mechanismen metabolischer Erkrankungen untersucht. Als konservierter Knotenpunkt in Elongationswegen von Lipiden stellt ELOVL2 ein gut zugängliches Ziel dar, um zu untersuchen, wie die Verfügbarkeit von PUFAs die Organellenfunktion und zelluläre Signalnetzwerke beeinflusst.
ELOVL2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ELOVL2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ELOVL2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ELOVL2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ELOVL2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.