Plasmide CRISPR/Cas9 KO Elongin B (h): sc-402154

Présentation

ELOB code pour l’Elongin B, un composant central du complexe Elongin BC, qui agit comme adaptateur au sein des assemblages de ligases E3 de l’ubiquitine et soutient la régulation transcriptionnelle via des interactions avec des facteurs d’élongation. Dans le complexe de ligase de l’ubiquitine von Hippel–Lindau (VHL), l’Elongin B contribue à l’échafaudage de la reconnaissance des substrats et des processus d’ubiquitination, qui influencent la signalisation de l’hypoxie, la protéostase et les réponses cellulaires au stress. Par ces fonctions, ELOB participe à la régulation du renouvellement des protéines et de voies couplées à la transcription, impliquées dans la biologie tumorale et l’adaptation cellulaire aux signaux du microenvironnement. La perturbation des complexes associés à Elongin BC est fréquemment étudiée dans les travaux portant sur la signalisation oncogénique, les réseaux de dégradation dépendants de l’ubiquitine et le contrôle transcriptionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Elongin B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ELOB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ELOB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ELOB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Elongin B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ELOB pour l'étude de la signalisation de Elongin B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ELOB essentiels à la fonction de Elongin B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ELOB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Elongin B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Elongin B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ELOB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Elongin B plasmide HDR (h) et le Elongin B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ELOB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ELOB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.