Elongin B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402154

Descripción general

ELOB codifica Elongin B, un componente central del complejo Elongin BC que actúa como adaptador en ensamblajes de ligasas E3 de ubiquitina y favorece la regulación transcripcional mediante interacciones con factores de elongación. En el complejo de ligasa de ubiquitina de von Hippel–Lindau (VHL), Elongin B ayuda a servir de andamiaje para el reconocimiento de sustratos y los procesos de ubiquitinación que influyen en la señalización de hipoxia, la proteostasis y las respuestas celulares al estrés. A través de estas funciones, ELOB contribuye a la regulación del recambio proteico y de vías acopladas a la transcripción implicadas en la biología tumoral y en la adaptación celular a señales del microambiente. La alteración de los complejos asociados a Elongin BC se examina con frecuencia en estudios sobre señalización oncogénica, redes de degradación dependientes de ubiquitina y control transcripcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Elongin B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ELOB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ELOB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ELOB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Elongin B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ELOB para la investigación de la señalización de Elongin B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ELOB críticos para la función de Elongin B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ELOB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Elongin B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Elongin B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ELOB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Elongin B (h) y el plásmido HDR Elongin B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ELOB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ELOB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.