Plasmide CRISPR/Cas9 KO Elongin A3 (h): sc-418260

Présentation

TCEB3C code l’Elongin A3 humain, un membre du complexe de facteurs d’élongation de la transcription Elongin, qui soutient la processivité de l’ARN polymérase II et coordonne la transcription avec le contrôle qualité co‑transcriptionnel. Les protéines de la famille Elongin s’interfacent avec des mécanismes de régulation dépendants de l’ubiquitine et contribuent à façonner des programmes cellulaires liés aux réponses au stress, à la protéostasie et au contrôle du cycle cellulaire. En tant que facteur associé à la transcription, l’Elongin A3 est pertinent pour l’étude de la régulation de l’expression génique et des voies de signalisation liées à la chromatine qui influencent la prolifération et la différenciation. La dérégulation de l’élongation transcriptionnelle et du contrôle médié par l’ubiquitine est fréquemment impliquée dans l’oncogenèse et les maladies neurodégénératives, ce qui fait de TCEB3C un locus utile pour des investigations mécanistiques dans des modèles pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Elongin A3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TCEB3C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TCEB3C, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TCEB3C à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Elongin A3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TCEB3C pour l'étude de la signalisation de Elongin A3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TCEB3C essentiels à la fonction de Elongin A3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TCEB3C pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Elongin A3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Elongin A3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TCEB3C. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Elongin A3 plasmide HDR (h) et le Elongin A3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TCEB3C pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TCEB3C définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.