Elongin A3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418260-ACT

TCEB3C kodiert Elongin A3, ein Mitglied der Elongin‑A‑Familie, das an der transkriptionellen Kontrolle durch RNA‑Polymerase II und an der Modulation der Transkriptionselongation beteiligt ist. Über Interaktionen mit Elongin‑Komplexen und transkriptionsassoziierten Proteinkomplexen wird Elongin A3 mit der Regulation von Genexpressionsprogrammen in Verbindung gebracht, die Zellzustandsübergänge, stressadaptive Antworten und proteostasebezogene Prozesse koordinieren. Veränderte Expression oder ein veränderter Signalwegkontext, der Elongationskontrolle und Ubiquitin‑Proteasom‑Regulation umfasst, wird in der Krebsbiologie und bei anderen Erkrankungen mit Transkriptionsdysregulation häufig untersucht, wodurch TCEB3C einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien darstellt. Die Funktion des humanen Elongin A3 ist daher relevant, um zu untersuchen, wie die Transkriptionsleistung über Signalwege und Chromatinzustände hinweg feinabgestimmt wird.

Elongin A3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TCEB3C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Elongin A3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TCEB3C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TCEB3C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Elongin A3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TCEB3C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Elongin A3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Elongin A3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TCEB3C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.