Plasmide CRISPR d'Activation (h) Elongin A: sc-404668-ACT

ELOA code pour l’Elongin A humain, un facteur d’élongation transcriptionnelle qui augmente la processivité de l’ARN polymérase II et favorise une synthèse efficace d’ARNm au niveau des gènes activement transcrits. Elongin A participe également à des voies de contrôle qualité dépendantes de l’ubiquitine en s’associant à des complexes Elongin qui contribuent à réguler l’élimination des machineries de transcription bloquées, reliant le stress transcriptionnel à la protéostasie. Par ces fonctions, ELOA contribue à des programmes d’expression génique qui régissent la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et l’adaptation au stress cellulaire. La dérégulation de l’élongation transcriptionnelle et des mécanismes de contrôle médiés par l’ubiquitine impliquant Elongin A a été mise en cause dans des contextes pertinents pour les programmes transcriptionnels oncogéniques et les défauts de maintenance du génome, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques.

Elongin A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ELOA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Elongin A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ELOA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ELOA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Elongin A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ELOA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Elongin A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Elongin A dans les cellules tumorales présentant une expression de ELOA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.