Plasmide CRISPR d'Activation (h) ELL2: sc-404784-ACT

ELL2 (eleven-nineteen lysine-rich leukemia 2) code un facteur d’élongation de l’ARN polymérase II qui améliore la processivité de la transcription en réduisant les pauses et en favorisant une élongation productive. En tant que partenaire fonctionnel du super elongation complex, ELL2 contribue à coordonner la maturation co-transcriptionnelle des ARN, notamment la maturation des ARNm et des programmes d’expression génique régulés impliqués dans la différenciation et les réponses au stress. Dans les contextes immunitaires, ELL2 est associé à la biologie des plasmocytes et à la sécrétion d’immunoglobulines, reflétant son influence sur des états transcriptionnels à très forte production. Une élongation transcriptionnelle dérégulée impliquant ELL2 a été associée à des programmes transcriptionnels liés aux hémopathies malignes, ainsi qu’à des perturbations plus générales des voies de synthèse de l’ARN.

ELL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ELL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ELL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ELL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ELL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ELL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ELL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ELL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ELL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ELL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.