ELL2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404784-ACT

ELL2 (eleven-nineteen lysine-rich leukemia 2) kodiert einen Elongationsfaktor der RNA-Polymerase II, der die Prozessivität der Transkription erhöht, indem er Pausen reduziert und eine produktive Elongation fördert. Als funktioneller Partner des Super-Elongation-Complex (SEC) trägt ELL2 zur Koordination der kotranskriptionellen RNA-Verarbeitung bei, einschließlich mRNA-Reifung und regulierter Genexpressionsprogramme in Differenzierung und Stressantworten. Im immunologischen Kontext ist ELL2 mit der Biologie von Plasmazellen und der Immunglobulinsekretion verknüpft, was seinen Einfluss auf Transkriptionszustände mit hoher Ausstoßleistung widerspiegelt. Eine fehlregulierte transkriptionelle Elongation unter Beteiligung von ELL2 wurde mit transkriptionellen Programmen in Zusammenhang gebracht, die mit hämatologischen Malignomen assoziiert sind, sowie mit breiteren Störungen der RNA-Synthesewege.

ELL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ELL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ELL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ELL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ELL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ELL2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ELL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ELL2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ELL2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ELL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.