Plasmide CRISPR d'Activation (h) Elk-1: sc-400385-ACT

ELK1 code Elk-1, un facteur de transcription à domaine ETS qui agit comme effecteur nucléaire des voies de signalisation activées par les mitogènes, en particulier en aval d’ERK/MAPK. Après phosphorylation, Elk-1 coopère avec le facteur de réponse au sérum (SRF) au niveau des éléments de réponse au sérum (SRE) pour réguler des programmes de transcription de gènes à réponse immédiate qui contrôlent la prolifération, la différenciation, la plasticité synaptique et les réponses au stress cellulaire. L’activité d’ELK1 intègre des signaux provenant des récepteurs aux facteurs de croissance et d’autres voies de kinases afin de façonner des sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la régulation génique dépendante des signaux. Une dérégulation de la signalisation d’Elk-1 et de l’expression de ses gènes cibles a été impliquée dans des programmes transcriptionnels oncogéniques et des phénotypes liés à la neurobiologie, ce qui étaye sa pertinence pour la modélisation mécanistique des maladies.

Elk-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ELK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Elk-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ELK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ELK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Elk-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ELK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Elk-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Elk-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ELK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.