Plasmide Double Nickase (h) elastin: sc-400640-NIC

ELN code pour l’élastine, une protéine centrale de la matrice extracellulaire qui s’assemble en fibres élastiques afin d’assurer le recul élastique et la résilience des artères, du poumon et de la peau. Les monomères d’élastine sont sécrétés puis réticulés au cours de l’élastogenèse via des interactions avec des échafaudages microfibrillaires et une maturation médiée par la lysyl‑oxydase, soutenant la biomécanique tissulaire et la mécanotransduction. Des perturbations de l’abondance ou de l’organisation de l’élastine influencent le remodelage vasculaire et l’homéostasie de la matrice extracellulaire, en interaction avec des voies qui régulent le phénotype des cellules musculaires lisses et l’intégrité du tissu conjonctif. Le dysfonctionnement d’ELN et la fragmentation des fibres élastiques sont associés à des affections héréditaires et acquises des tissus vasculaires et conjonctifs, ce qui en fait un locus clé pour l’étude de la biologie de la matrice.

elastin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ELN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ELN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ELN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ELN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.