Plasmide CRISPR d'Activation (h) elastin: sc-400640-ACT

Le gène humain **ELN** code l’élastine, une protéine de la matrice extracellulaire fortement réticulée qui confère élasticité et capacité de recul à des tissus tels que la paroi artérielle, le poumon et la peau. L’élastine est déposée sous forme de tropoélastine puis assemblée sur des échafaudages microfibrillaires, reliant l’organisation de la matrice au comportement des cellules musculaires lisses, à la mécanotransduction et aux voies de remodelage de la matrice extracellulaire. L’expression d’**ELN** et l’intégrité des fibres d’élastine influencent la compliance vasculaire et l’homéostasie du tissu conjonctif, faisant le lien entre une élastogenèse altérée et des troubles héréditaires ou acquis caractérisés par des sténoses artérielles, une susceptibilité aux anévrismes et une laxité cutanée. En tant que composant matriciel à longue demi-vie, l’élastine est fréquemment étudiée dans des modèles de développement, de vieillissement et de modifications biomécaniques des tissus associées à la fibrose.

elastin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ELN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

elastin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ELN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ELN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de elastin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ELN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de elastin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie elastin dans les cellules tumorales présentant une expression de ELN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.