Plasmide CRISPR d'Activation (h) Elastase-1: sc-402707-ACT

Le gène humain CELA1 code l’élastase-1, une protéase à sérine sécrétée qui catalyse le remodelage protéolytique des composants de la matrice extracellulaire et contribue au traitement régulé des peptides dans les tissus muqueux et glandulaires. L’activité de l’élastase-1 s’inscrit dans l’équilibre protéases–antiprotéases, la signalisation inflammatoire et les processus de remodelage tissulaire qui influencent l’intégrité épithéliale et les interactions avec le stroma. Une activité de l’élastase dérégulée a été associée à une dégradation pathologique de la matrice et à des microenvironnements inflammatoires chroniques, ce qui fait de CELA1 une cible pertinente pour l’étude du remodelage des voies aériennes, de la protéolyse associée à la fibrose et du dialogue tumeur–stroma. En tant que protéase liée aux fonctions digestives et aux barrières tissulaires, CELA1 est également utile pour explorer la dynamique de la voie de sécrétion et les réseaux de signalisation pilotés par les protéases.

Elastase-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CELA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Elastase-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CELA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CELA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Elastase-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CELA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Elastase-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Elastase-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CELA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.