Plasmide CRISPR/Cas9 KO EKLF/KLF1 (h): sc-402366

Présentation

KLF1 (facteur érythroïde de type Krüppel ; EKLF) est un facteur de transcription à doigts de zinc qui agit comme régulateur maître de l’engagement dans la lignée érythroïde et de la maturation terminale des globules rouges. Il se lie aux motifs CACCC pour contrôler des programmes d’expression génique spécifiques de l’érythroïde, notamment la régulation des gènes de la globine, la synthèse de l’hémoglobine, le remodelage de la membrane et du cytosquelette, ainsi que la coordination des voies associées à l’énucléation. KLF1 interagit avec la chromatine et la machinerie transcriptionnelle pour façonner les états de différenciation érythroïde et l’adaptation métabolique au cours de l’érythropoïèse. Des perturbations génétiques ou une expression dérégulée de KLF1 sont associées à des phénotypes héréditaires des globules rouges et à des défauts de commutation de l’hémoglobine, ce qui souligne son importance dans l’étude des mécanismes liés à l’anémie et de la biologie du développement érythroïde.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EKLF/KLF1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KLF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KLF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KLF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EKLF/KLF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KLF1 pour l'étude de la signalisation de EKLF/KLF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KLF1 essentiels à la fonction de EKLF/KLF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KLF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EKLF/KLF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EKLF/KLF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KLF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EKLF/KLF1 plasmide HDR (h) et le EKLF/KLF1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KLF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KLF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.