Plasmide Double Nickase (h) eIF5: sc-402133-NIC

EIF5 code le facteur d’initiation de la traduction eucaryote 5 (eIF5), un régulateur central de l’initiation de la traduction qui agit comme protéine activatrice de la GTPase pour eIF2 afin de favoriser la reconnaissance du codon de départ et l’assemblage productif du ribosome 80S. En modulant l’hydrolyse du complexe eIF2–GTP et la fidélité du balayage, eIF5 contribue à coordonner la synthèse protéique globale avec les réponses au stress cellulaire et le contrôle de la croissance, en s’intégrant à des voies telles que la signalisation eIF2 et la réponse intégrée au stress. Des altérations du contrôle traductionnel impliquant eIF5 ont été associées à une prolifération dérégulée et à des perturbations de la protéostasie, faisant d’EIF5 un point d’entrée utile pour étudier comment la dynamique des facteurs d’initiation influence des programmes oncogéniques et d’adaptation au stress. Dans les cellules humaines, la perturbation d’EIF5 peut révéler des dépendances liées à la reprogrammation traductionnelle, à l’initiation spécifique de certains ARNm et à la biologie des granules de stress.

eIF5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.