Plasmide Double Nickase (h) eIF4E2: sc-403245-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) eIF4E2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide eIF4E2 Double Nickase (h) et le plasmide eIF4E2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF4E2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: eIF4E2 Antibody (YB-18): sc-100731
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) eIF4E2 | sc-403245-NIC | 20 µg | $410.00 |
EIF4E2 code pour eIF4E2 (également connu sous le nom de 4EHP), un facteur d’initiation de la traduction se liant à la coiffe qui module le devenir des ARNm en entrant en compétition avec eIF4E pour la coiffe m7G 5′ et en coordonnant une répression traductionnelle sélective. eIF4E2 intervient dans la régulation génique post‑transcriptionnelle via des interactions avec des protéines liant l’ARN et des complexes effecteurs des miARN, influençant la stabilité des ARNm et le recrutement des ribosomes dans des voies qui contrôlent le développement, la différenciation et les réponses au stress. Il a également été associé à des programmes de traduction adaptatifs à l’hypoxie et à la protéostasie, en façonnant la synthèse de protéines impliquées dans la survie cellulaire et le métabolisme. Une dérégulation du contrôle de la traduction dépendante de la coiffe impliquant des réseaux associés à eIF4E2 est pertinente pour l’étude de la biologie tumorale, de la neurobiologie et de l’adaptation cellulaire au stress, où une sélectivité traductionnelle altérée peut remodeler les profils d’expression génique.
eIF4E2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF4E2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF4E2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF4E2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF4E2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.