Plasmide CRISPR d'Activation (h) eIF4E2: sc-403245-ACT

EIF4E2 code eIF4E2 (également appelé 4EHP), un facteur d’initiation de la traduction se liant à la coiffe, qui module la synthèse protéique sélective des ARNm en entrant en compétition avec eIF4E et en s’associant à des répresseurs pour contrôler la traduction dépendante de la coiffe. eIF4E2 contribue à la régulation post‑transcriptionnelle lors des réponses au stress, de la différenciation et de l’hypoxie, en influençant la stabilité des ARNm et la production traductionnelle dans des voies liées à la détection de l’oxygène et à l’adaptation cellulaire. Par ses interactions avec des protéines liant l’ARN et des complexes associés aux microARN, il façonne des programmes d’expression génique qui affectent le contrôle du cycle cellulaire, le métabolisme et la survie. Un dérèglement du contrôle traductionnel médié par eIF4E2 a été impliqué dans des contextes pertinents pour la biologie du cancer et d’autres maladies où une synthèse protéique aberrante et des signaux de stress sont marqués.

eIF4E2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EIF4E2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

eIF4E2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EIF4E2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EIF4E2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de eIF4E2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EIF4E2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de eIF4E2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie eIF4E2 dans les cellules tumorales présentant une expression de EIF4E2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.