Plasmide Double Nickase (m) eIF4E: sc-420148-NIC

Le gène murin **Eif4e** code **eIF4E**, la sous-unité de liaison à la coiffe du complexe d’initiation de la traduction **eIF4F**, qui reconnaît la coiffe **7‑méthylguanosine** et favorise le recrutement des ribosomes sur les ARNm. L’activité d’eIF4E intègre les signaux nutritifs et ceux des facteurs de croissance via la régulation **mTORC1–4E‑BP**, et coopère avec la phosphorylation dépendante des voies **MAPK/MNK** pour ajuster la traduction sélective de transcrits impliqués dans la prolifération, le métabolisme et les réponses au stress. Des altérations de l’abondance ou de la régulation d’eIF4E sont associées à une reprogrammation traductionnelle et à une dérégulation des programmes de croissance cellulaire, faisant d’**Eif4e** un nœud clé pour l’étude du contrôle post‑transcriptionnel en biologie du cancer et des phénotypes du développement. Dans des modèles murins, la perturbation d’**Eif4e** permet une dissection mécanistique de la traduction dépendante de la coiffe, de la protéostasie et de l’expression génique couplée aux voies de signalisation.

eIF4E Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Eif4e dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Eif4e. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Eif4e. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Eif4e.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.