Plasmide Double Nickase (h) eIF4E: sc-400415-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) eIF4E correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide eIF4E Double Nickase (h) et le plasmide eIF4E Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF4E. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: eIF4E Antibody (P-2): sc-9976
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) eIF4E | sc-400415-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) eIF4E | sc-400415-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4E code pour eIF4E, la sous-unité de liaison à la coiffe du complexe d’initiation de la traduction eIF4F, qui reconnaît la coiffe 7‑méthylguanosine des ARNm et favorise le recrutement des ribosomes pour initier la synthèse protéique. L’activité de eIF4E intègre des signaux provenant des voies PI3K–AKT–mTOR et MAPK via une régulation par les protéines 4E‑BP et une phosphorylation dépendante de MNK, reliant les signaux de croissance à la traduction sélective de transcrits impliqués dans la prolifération, la survie et les réponses au stress. Une expression d’EIF4E ou un contrôle de sa signalisation dérégulés sont associés à une reprogrammation aberrante de la traduction dans la biologie du cancer et ont également été impliqués dans des études sur le neurodéveloppement et les interactions virus–hôte. En tant que nœud central de la traduction dépendante de la coiffe, EIF4E est largement utilisé pour étudier le contrôle traductionnel, la sélection des ARNm et des phénotypes liés à la protéostasie dans des modèles de cellules humaines.
eIF4E Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF4E dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF4E. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF4E. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF4E.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.