Plasmide Double Nickase (h) eIF4B: sc-402494-NIC

EIF4B code eIF4B, un facteur auxiliaire d’initiation de la traduction qui renforce l’activité hélicase ARN de eIF4A et favorise le recrutement des ribosomes sur des ARNm structurés lors de l’initiation dépendante de la coiffe. Par ses interactions avec le complexe eIF4F et via une phosphorylation régulatrice en aval des voies de signalisation PI3K–AKT–mTOR et MAPK, eIF4B contribue à ajuster la production traductionnelle au cours de la croissance, des réponses au stress et de la progression du cycle cellulaire. Une expression ou un état d’activation altérés de EIF4B ont été associés à des programmes de synthèse protéique dérégulés, contribuant à la signalisation oncogénique et à une prolifération cellulaire aberrante. En tant que nœud reliant les voies de signalisation à la traduction sélective des ARNm, EIF4B est fréquemment étudié dans les mécanismes contrôlant la protéostasie, la dynamique des granules de stress et la régulation, dépendante de la traduction, de l’apoptose et du métabolisme.

eIF4B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF4B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF4B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF4B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF4B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.