Plasmide Double Nickase (h) eIF4AIII: sc-402660-NIC

EIF4A3 code eIF4AIII, une hélicase d’ARN de type DEAD-box qui constitue un composant central du complexe de jonction des exons (EJC), reliant l’épissage du pré-ARNm aux étapes ultérieures d’export, de localisation et de traduction de l’ARNm, ainsi qu’à la dégradation médiée par les codons stop prématurés (NMD). En se fixant sur l’ARN de manière dépendante de l’ATP, eIF4AIII contribue à définir l’architecture des ribonucléoprotéines messagères après l’épissage et influence la surveillance des transcrits ainsi que la fidélité du protéome. Des altérations de la fonction ou de l’expression d’EI F4A3 ont été associées à une dérégulation de programmes de maturation de l’ARN, pertinente pour des phénotypes neurodéveloppementaux et des modifications de l’expression génique liées au cancer. Par conséquent, EIF4A3 est fréquemment étudié dans les voies qui régissent le métabolisme de l’ARN, les résultats d’épissage à l’échelle du génome et le contrôle traductionnel en réponse au stress.

eIF4AIII Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF4A3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF4A3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF4A3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF4A3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.