Plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF4AII (h): sc-402758

Présentation

EIF4A2 code pour l’hélicase ARN humaine eIF4AII, dépendante de l’ATP, un composant central de la machinerie d’initiation de la traduction eIF4F qui remodèle la structure secondaire des 5′ UTR afin de faciliter le balayage ribosomal dépendant de la coiffe. En contrôlant le recrutement des ARNm et la reconnaissance du codon d’initiation, eIF4AII influence des programmes de synthèse protéique à l’échelle globale et de manière sélective selon les transcrits, liés à la croissance cellulaire, à l’adaptation au stress et à la différenciation. Son activité recoupe des voies du métabolisme des ARN et des nœuds de contrôle traductionnel qui intègrent des signaux en amont affectant la prolifération et la survie. Une initiation de la traduction dérégulée, incluant une altération de la fonction de la famille eIF4A, est fréquemment impliquée dans le remodelage oncogénique du protéome et dans d’autres troubles associés à une régulation anormale des ARNm.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF4AII (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EIF4A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EIF4A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EIF4A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine eIF4AII.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EIF4A2 pour l'étude de la signalisation de eIF4AII, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EIF4A2 essentiels à la fonction de eIF4AII
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EIF4A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le eIF4AII plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le eIF4AII plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EIF4A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le eIF4AII plasmide HDR (h) et le eIF4AII (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EIF4A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EIF4A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.