Plasmide Double Nickase (m) eIF3ζ: sc-424946-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) eIF3ζ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide eIF3ζ Double Nickase (m) et le plasmide eIF3ζ Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Eif3d. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: eIF3ζ Antibody (H-7): sc-271515
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) eIF3ζ | sc-424946-NIC | 20 µg | $410.00 |
Eif3d code chez la souris le facteur eucaryote d’initiation de la traduction 3, sous-unité zêta (eIF3ζ), un composant du complexe multiprotéique eIF3 qui coordonne l’assemblage du complexe de pré-initiation 43S et favorise une traduction efficace des ARNm dépendante de la coiffe. En régulant l’efficacité de l’initiation et la sélection des ARNm, eIF3ζ influence l’homéostasie du protéome et s’intègre aux voies de signalisation qui contrôlent la croissance, l’adaptation au stress et la progression du cycle cellulaire, notamment le contrôle traductionnel régulé par mTOR. La perturbation des facteurs d’initiation de la traduction est fréquemment associée à une prolifération et une fitness cellulaire altérées, ce qui fait d’Eif3d un locus utile pour étudier des programmes de synthèse protéique dérégulés dans des contextes pertinents pour la maladie.
eIF3ζ Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Eif3d dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Eif3d. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Eif3d. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Eif3d.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.