Plasmide Double Nickase (h) EIF2D: sc-405379-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) EIF2D correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EIF2D Double Nickase (h) et le plasmide EIF2D Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF2D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: eIF2D Antibody (2D10): sc-293396
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) EIF2D | sc-405379-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) EIF2D | sc-405379-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2D code le facteur d’initiation de la traduction eucaryote 2D, un facteur d’initiation non canonique impliqué dans des modes alternatifs d’initiation de la traduction et dans l’acheminement d’ARNt vers le site P du ribosome dans certains contextes cellulaires. Par son rôle dans le contrôle traductionnel, EIF2D se situe à l’intersection de voies régissant la protéostase et les réponses adaptatives au stress cellulaire, notamment des modules liés à la signalisation eIF2 et à la dynamique de la réponse intégrée au stress. La perturbation de l’initiation de la traduction et de la synthèse protéique adaptative au stress est largement pertinente pour des mécanismes étudiés dans la neurodégénérescence, la plasticité des cellules cancéreuses et des modèles d’infection virale, où des programmes de traduction altérés peuvent remodeler les transitions d’état cellulaire. Par conséquent, EIF2D est souvent étudié afin de comprendre comment des changements dans l’utilisation des facteurs d’initiation influencent la traduction spécifique de certains ARNm et les phénotypes en aval.
EIF2D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF2D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF2D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF2D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF2D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.