Plasmide Double Nickase (h) eIF2C: sc-400813-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) eIF2C correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide eIF2C Double Nickase (h) et le plasmide eIF2C Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AGO2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: eIF2C Antibody (B-3): sc-376696
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) eIF2C | sc-400813-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) eIF2C | sc-400813-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’AGO2 humain (eIF2C2) code l’Argonaute 2, cœur catalytique du complexe de silençage induit par l’ARN (RISC), qui se lie aux petits ARN et dirige une régulation post‑transcriptionnelle des gènes spécifique de la séquence. AGO2 assure une activité endonucléolytique de type « slicer » pour certaines cibles d’ARNsi et d’ARNmi, contribuant au clivage des ARNm, à la répression de la traduction et à la dégradation des ARNm. Par ces fonctions, il module des voies contrôlant la prolifération, la différenciation, les réponses antivirales innées et les programmes d’adaptation au stress. Une expression dérégulée d’AGO2 ou une activité anormale du RISC a été associée à des altérations des réseaux d’ARNmi observées dans de nombreux cancers et troubles neurologiques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour étudier le silençage par l’ARN et les circuits de régulation génique.
eIF2C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AGO2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AGO2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AGO2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AGO2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.