Plasmide Double Nickase (m) eIF2A: sc-432849-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) eIF2A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide eIF2A Double Nickase (m) et le plasmide eIF2A Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Eif2a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: eIF2A Antibody (3A7A8): sc-517214
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) eIF2A | sc-432849-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) eIF2A | sc-432849-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Eif2a** code **eIF2A**, un facteur alternatif d’initiation de la traduction qui facilite l’apport de la Met‑ARNt initiatrice au ribosome lorsque l’activité de l’eIF2 canonique est limitée. eIF2A contribue au contrôle traductionnel en situation de stress cellulaire, en s’articulant avec la signalisation de la réponse intégrée au stress (ISR) et avec des programmes de traduction sélective qui aident à remodeler la protéostase. En modulant la manière dont les cellules initient la synthèse protéique lors d’une limitation en nutriments, d’un stress du réticulum endoplasmique (RE) ou d’autres perturbations, **Eif2a** influence des voies impliquées dans la survie, la différenciation et l’adaptation. Une initiation de la traduction dérégulée et une synthèse protéique sensible au stress sont largement pertinentes pour la neurodégénérescence, les dysfonctionnements métaboliques et la biologie des cancers, ce qui fait d’**Eif2a** un nœud utile pour des études mécanistiques de l’expression génique couplée au stress.
eIF2A Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Eif2a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Eif2a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Eif2a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Eif2a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.