Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) eIF2α: sc-400199-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) eIF2α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide eIF2α Double Nickase (h) et le plasmide eIF2α Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF2S1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: eIF2α Antibody (D-3): sc-133132
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) eIF2α | sc-400199-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) eIF2α | sc-400199-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2S1 code la sous-unité alpha du facteur d'initiation de la traduction eucaryote 2 (eIF2α), un régulateur central de l'initiation de la traduction dépendante de la coiffe et un nœud clé de la réponse intégrée au stress (ISR). La phosphorylation d'eIF2α sur la Ser51 par des kinases activées par le stress telles que PERK (EIF2AK3), GCN2 (EIF2AK4), PKR (EIF2AK2) et HRI (EIF2AK1) réduit la disponibilité du complexe ternaire, atténuant globalement la synthèse protéique tout en permettant des programmes de traduction sélectifs. Cet axe de signalisation coordonne la protéostasie, l'adaptation au stress du RE, l'autophagie et les réponses immunitaires innées via des effecteurs en aval, notamment ATF4 et CHOP/DDIT3. Une signalisation eIF2α dérégulée est impliquée dans des contextes tels que la neurodégénérescence, la tolérance des cellules cancéreuses au stress, les réponses aux infections virales et le stress métabolique, faisant d'EIF2S1 une cible couramment utilisée pour étudier les mécanismes de contrôle translationnel.
eIF2α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF2S1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF2S1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF2S1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF2S1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.