Plasmide CRISPR d'Activation (h) eIF2α: sc-400199-ACT

EIF2S1 code la sous-unité alpha du facteur d’initiation de la traduction eucaryote 2 humain (eIF2α), un régulateur central de l’initiation de la traduction des ARNm et de la protéostase. La phosphorylation d’eIF2α sur la sérine 51 intègre les signaux de la réponse intégrée au stress (ISR) via des kinases notamment PERK, GCN2, PKR et HRI, réduisant la synthèse protéique globale tout en favorisant des programmes de traduction sélectifs tels qu’ATF4. Par ce mécanisme, EIF2S1 relie le stress du RE, la privation de nutriments, la détection virale et le stress oxydatif à un remodelage adaptatif de la transcription et du métabolisme. Une signalisation d’eIF2α dérégulée a été impliquée dans divers contextes, tels que la neurodégénérescence, la tolérance des cellules cancéreuses au stress et la physiopathologie inflammatoire, faisant de la modulation d’EIF2S1 un outil utile pour disséquer ces voies.

eIF2α Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EIF2S1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

eIF2α Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EIF2S1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EIF2S1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de eIF2α. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EIF2S1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de eIF2α au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie eIF2α dans les cellules tumorales présentant une expression de EIF2S1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.