Plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF1B (h): sc-403809

Présentation

EIF1B code le facteur d’initiation de la traduction eucaryote 1B (eIF1B), un petit facteur d’initiation impliqué dans les étapes précoces de l’initiation de la traduction dépendante de la coiffe et dans la sélection du codon de départ, via la régulation de la dynamique du complexe de pré‑initiation ribosomique 40S. En influençant le scanning et la fidélité de l’initiation, eIF1B contribue à l’homéostasie du protéome et à la réponse cellulaire aux signaux de croissance et au stress, qui modulent la synthèse protéique globale. La perturbation des réseaux de facteurs d’initiation de la traduction est fréquemment associée à des programmes de prolifération cellulaire altérés et à des voies d’adaptation au stress, des processus couramment étudiés en biologie du cancer et en recherche neurodéveloppementale. EIF1B est donc pertinent pour des études mécanistiques reliant le contrôle translationnel au remodelage de l’expression génique dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF1B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EIF1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EIF1B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EIF1B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine eIF1B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EIF1B pour l'étude de la signalisation de eIF1B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EIF1B essentiels à la fonction de eIF1B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EIF1B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le eIF1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le eIF1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EIF1B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le eIF1B plasmide HDR (h) et le eIF1B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EIF1B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EIF1B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.