Plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF1 (m): sc-423216

Présentation

Eif1 chez la souris code le facteur d’initiation de la traduction eucaryote 1 (eIF1), un composant conservé du complexe de pré‑initiation 43S qui favorise une sélection précise du codon de démarrage lors de l’initiation de la traduction dépendante de la coiffe. En imposant une plus grande rigueur lors du balayage et en stabilisant une conformation ouverte de la sous‑unité 40S, eIF1 contribue à contrôler la synthèse protéique globale et la fidélité du protéome. Cette fonction relie Eif1 à des programmes de contrôle traductionnel qui modèlent la croissance cellulaire, l’adaptation au stress et la différenciation via une initiation sélective selon les ARNm. La perturbation de la fidélité de l’initiation de la traduction est largement pertinente dans des états associés aux maladies, caractérisés par une protéostasie altérée et une signalisation de croissance aberrante, faisant d’Eif1 un nœud utile pour des études mécanistiques de la dérégulation traductionnelle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Eif1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Eif1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Eif1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine eIF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Eif1 pour l'étude de la signalisation de eIF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Eif1 essentiels à la fonction de eIF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Eif1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le eIF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le eIF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Eif1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le eIF1 plasmide HDR (m) et le eIF1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Eif1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Eif1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.