Plasmide CRISPR d'Activation (h) EHZF: sc-404324-ACT

ZNF521 code la protéine humaine à doigts de zinc EHZF, un régulateur transcriptionnel nucléaire qui module des programmes d’expression génique liés au contrôle du destin cellulaire, à la prolifération et à l’engagement de lignée. Grâce à ses domaines « doigt de zinc » de liaison à l’ADN et à ses interactions avec des complexes corégulateurs, EHZF influence des réseaux transcriptionnels dépendants de la chromatine, importants dans des contextes hématopoïétiques et neuronaux. Une expression dérégulée de ZNF521 a été associée à des états de différenciation altérés et à une signalisation de croissance aberrante observés dans plusieurs modèles liés au cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des circuits transcriptionnels oncogéniques. En tant que nœud au sein de voies plus larges de transcription et d’épigénétique, EHZF est fréquemment étudiée pour son impact sur des phénotypes de type cellules souches, des programmes géniques du développement et des boucles de rétrocontrôle régulatrices dépendantes du contexte.

EHZF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZNF521 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EHZF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZNF521 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZNF521, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EHZF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZNF521 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EHZF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EHZF dans les cellules tumorales présentant une expression de ZNF521 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.