Plasmide Double Nickase (h) EHD1: sc-407060-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) EHD1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EHD1 Double Nickase (h) et le plasmide EHD1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EHD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) EHD1 | sc-407060-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) EHD1 | sc-407060-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EHD1 (EH domain containing 1) code une ATPase de la famille des protéines EHD qui régule le recyclage endocytaire et le remodelage des membranes, en coordonnant le retour des récepteurs et des lipides depuis les endosomes de recyclage vers la membrane plasmique. Par ses interactions avec les phospholipides et des adaptateurs de l’endocytose, EHD1 favorise le trafic associé à la clathrine, la formation d’endosomes tubulaires et des programmes de recyclage des récepteurs qui modulent l’amplitude de la signalisation et la migration cellulaire. Le trafic dépendant d’EHD1 influence des voies liées à l’absorption de nutriments et au renouvellement des récepteurs aux facteurs de croissance, notamment la dynamique de recyclage du récepteur de la transferrine et d’EGFR. Une expression ou une fonction d’EHD1 dérégulée a été associée dans la littérature à des modifications du comportement invasif et à une reprogrammation de la signalisation dans des modèles de cancer, ainsi qu’à des perturbations de la polarité épithéliale et du trafic membranaire neuronal, pertinentes pour la neurobiologie.
EHD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EHD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EHD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EHD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EHD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.